在化學中，分光光度法是定量測量材料的反射或透射特性作為波長的函數。它比通用術語電磁光譜更具體，因為分光光度法處理可見光、近紫外和近紅外，但不包括時間分辨光譜技術。

　　分光光度法使用光度計，稱為分光光度計，它可以測量光束的強度作為其顏色(波長)的函數。分光光度計的重要特征是光譜帶寬(它可以通過測試樣品透射的顏色范圍)、樣品透射百分比、樣品吸收的對數范圍，有時還有反射率測量的百分比。

　　分光光度計通常用于測量溶液、透明或不透明固體(如拋光玻璃)或氣體的透射率或反射率。盡管許多生化物質是有色的，例如它們吸收可見光，因此可以通過比色程序進行測量，但即使是無色的生化物質通常也可以轉化為適合顯色成色反應的有色化合物，從而產生適合比色分析的化合物。然而，它們也可以設計為使用不同的控制和校準來測量通常覆蓋約200nm至2500nm 的任何列出的光范圍的擴散率。在這些光范圍內，需要使用根據光度測定波長而不同類型的標準在機器上進行校準。

　　使用分光光度法的實驗的一個例子是確定溶液的平衡常數。溶液中的某種化學反應可以正向和反向發生，其中反應物形成產物，產物分解成反應物。在某個時刻，這種化學反應會達到一個平衡點，稱為平衡點。為了確定此時反應物和產物的各自濃度，可以使用分光光度法測試溶液的透光率。通過溶液的光量表示不允許光通過的某些化學物質的濃度。

　　光的吸收是由于光與分子的電子和振動模式的相互作用。每種類型的分子都有一組與其化學鍵和原子核的組成相關的單獨的能級，因此會吸收特定波長或能量的光，從而產生獨特的光譜特性。這是基于其特定和獨特的構成。

　　分光光度計的使用跨越多個科學領域，如物理學、材料科學、化學、生物化學和分子生物學。它們廣泛用于許多行業，包括半導體、激光和光學制造、印刷和法醫檢驗，以及用于研究化學物質的實驗室。分光光度法通常用于測量酶活性、確定蛋白質濃度、確定酶動力學常數和測量配體結合反應。最終，分光光度計能夠根據控制或校準來確定目標中存在哪些物質，以及通過計算觀察到的波長來準確確定物質的含量。